产品货号：
BTN15-59100
中文名称：
牛结节疹病毒探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：
Bovine Lumpy Skin Disease Virus（LSDV）Probe PCR Kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本产品是为此目的根据探针法qPCR原理开发的试剂盒。
牛结节疹病毒(Lumpy skin disease virus，LSDV)又牛疙瘩皮肤病毒或牛结节性皮肤病病毒，该病毒的代表株是Naethling株，因此又叫Naethling病毒。该病毒形态与牛痘苗病毒相似，它引起的以患牛发热，皮肤、黏膜、器官表面广泛性结节，淋巴结肿大，皮肤水肿为特征的传染病，最后感染动物消瘦，产乳量大幅度降低，严重时导致死亡。该病起源于非洲，2010年以来，确认在此期间曾发生或正在发生该病的国家多达43个，分布于非亚欧三大洲，其中非洲疫情尤为严重。随着我国与非洲国家交往的不断加强，国际贸易范围不断扩大，该病传入我国的风险不断加大，因此掌握该病的流行状况、开展相应的诊断检测技术研究以及制订相关技术标准不仅十分必要而且迫在眉睫。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。
二、样品DNA的制备
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
五、数据处理
相关搜索：牛结节疹病毒探针法荧光定量PCR试剂盒，LSDV荧光定量PCR试剂盒
牛结节疹病毒(Lumpy skin disease virus，LSDV)又牛疙瘩皮肤病毒或牛结节性皮肤病病毒，该病毒的代表株是Naethling株，因此又叫Naethling病毒。该病毒形态与牛痘苗病毒相似，它引起的以患牛发热，皮肤、黏膜、器官表面广泛性结节，淋巴结肿大，皮肤水肿为特征的传染病，最后感染动物消瘦，产乳量大幅度降低，严重时导致死亡。该病起源于非洲，2010年以来，确认在此期间曾发生或正在发生该病的国家多达43个，分布于非亚欧三大洲，其中非洲疫情尤为严重。随着我国与非洲国家交往的不断加强，国际贸易范围不断扩大，该病传入我国的风险不断加大，因此掌握该病的流行状况、开展相应的诊断检测技术研究以及制订相关技术标准不仅十分必要而且迫在眉睫。
- 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
- 根据牛结节疹病毒保守区域设计引物和探针，能专一性地检测出样品中的牛结节疹病毒成分，但不能检测其他非牛结节疹病毒成分。
- 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 一管式闭管操作，降低了交叉污染。
- 快速，整个检测过程(按一个样品计)所需时间仅为2.0小时。
- 本产品只能用于科研，足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR。
| 组分 | 规格 |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 0.5mL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 牛结节疹病毒探针法qPCR引物混合液 | 100μL |
| 牛结节疹病毒qPCR探针 | 50μL |
| 牛结节疹病毒探针法qPCR阳性对照(1×108拷贝/uL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
- 在7号管中加入5μL阳性对照(浓度为1×108拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
- 用自选方法纯化样品的DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
- 如果有N个样品，则需要进行N+2个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的核酸释放剂试用装，则请到www.bjbalb.com输入产品名称核酸释放剂或货号：BTN61202下载手册并按手册操作，制备样品。
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于PCR阳性对照(用第一步稀释得到的标准曲线系列稀释液的第4号做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复)：
成分 样品管
N+2个PCR阴性
对照管曲线样品管
(2～7管)2×Probe qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL 牛结节疹病毒探针法qPCR探针 1μL 1μL 各1μL 牛结节疹病毒探针法qPCR引物混合液 2μL 2μL 各2μL N+2个待测样品DNA模板 7μL - - 超纯水 - 7μL - 第7步所得标准曲线样品稀释液(2～7号) - - 各7μL
四、qPCR反应参数 - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程 温度 时间 预热 50℃ 2min 预变性 95℃ 10min PCR反应
(50个循环)95℃ 15sec 60℃ 1min(采集FAM通道的荧光信号)
五、数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于
30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35～40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
相关搜索：牛结节疹病毒探针法荧光定量PCR试剂盒，LSDV荧光定量PCR试剂盒